多巴胺試劑盒可用于人血漿和尿液中多巴胺的體外定量檢測，可手動操作，也可自動操作。進一步的研究表明：此試劑盒還可用于組織勻漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清液的研究。 兒茶酚胺類激素腎上xian素、去甲腎上xian素和多巴胺主要由腎上腺髓質(zhì)、交感神經(jīng)系統(tǒng)和大腦產(chǎn)生。它們幾乎影響所有的組織，并與其它激素和神經(jīng)系統(tǒng)一起參與各種生理過程的調(diào)節(jié)。在許多疾病中，兒茶酚胺激素及其代謝產(chǎn)物間甲腎上xian素和去甲變腎上xian素的分泌量都會增加，因而這些激素可用于疾病的診斷。所以，這些激素的檢測對于疾病的診斷及神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤疾病的具有重要意義。它主要用于嗜鉻細(xì)胞瘤的診斷，當(dāng)然也用于成神經(jīng)細(xì)胞瘤和神經(jīng)節(jié)細(xì)胞瘤的診斷。
因為在實驗一開始時有提取步驟，所以用戶可使用所有動物材料進行實驗。此試劑盒可檢測大鼠、小鼠或其它動物，所有動物的兒茶酚胺的化學(xué)結(jié)構(gòu)相同。
多巴胺試劑盒檢測原理
多巴胺試劑盒利用的是ELISA的夾心法。微孔中包被了羊抗兔抗體。在溫育時間之內(nèi)，加入的抗體可直接與抗原分子上的一個表位結(jié)合。樣品中的抗原與酶標(biāo)二抗（可與抗原分子上的不同表位結(jié)合）在包被孔中溫育。加入底物液后，溶液所顯示的顏色強度與樣品中抗原的量成正比。樣品的結(jié)果可直接用標(biāo)準(zhǔn)曲線確定。
貯存與穩(wěn)定性
多巴胺試劑盒和運輸環(huán)境和儲存環(huán)境溫度為2-8℃，避免熱源或太陽直射。樣品的儲存與穩(wěn)定性及試劑的準(zhǔn)備將在相關(guān)章節(jié)中闡述。開封的試劑盒在有效期內(nèi)穩(wěn)定，前提是要將試劑盒用袋子密封并儲存于2-8℃的環(huán)境下。
實驗所需器材（但試劑盒不提供）
1、移液器（10；10-100；100-1000μL）
2、軌道搖床（200-900rpm）
3、旋渦混合器
4、帶儲器的8通道移液器
5、洗滌瓶，自動或半自動包被板清洗系統(tǒng)
6、酶標(biāo)儀，405nm(參考波長：620-650 nm)
7、雙蒸水或去離子水
8、吸水紙，取樣吸頭，計時器
9、樣品稀釋用試管
多巴胺試劑盒檢測步驟
1、在一次性試管內(nèi)，用釋放緩沖液以1:51的比例稀釋提取的標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品和尿液樣本（如：10ul提取樣本+500ul的釋放緩沖液）
2、在包被板的每一微孔中加入75μL剛配置好的COMT酶溶液，輕輕振蕩。
3、將預(yù)稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品和尿液樣本加100ul至相應(yīng)孔內(nèi)血漿樣本直接加100ul于相應(yīng)孔內(nèi)在此步驟中，將槍頭直接觸碰COMT酶溶液，顏色會轉(zhuǎn)為粉紅色，輕輕混勻。
4、每孔中加入50μL多巴胺抗血清。
5、蓋板。在振蕩器（400-600rpm）上18-25℃的環(huán)境下溫育120min
6、棄去孔內(nèi)反應(yīng)液，每孔用250-300μL已稀釋好的洗滌液洗板6次。
7、每孔加入100μL酶聯(lián)物
8、蓋板。在軌道搖床（400-600rpm）上18-25℃的環(huán)境下溫育60min
9、棄去孔內(nèi)反應(yīng)液，用250-300μL已稀釋好的洗滌液洗板6次。
10、加底物液和終止液時，其時間間隔應(yīng)相同
11、每孔加入200μL底物液
12、在軌道搖床（400-600rpm）上18-25℃的環(huán)境下溫育40min。如果自動操作時的溫度超過25℃時，則應(yīng)相應(yīng)的將溫育時間縮短至30min。
13、每孔加入50μL PNPP終止液以終止底物反應(yīng)，輕輕振蕩包被板以充分混合試劑成分。
14、加終止液后60min之內(nèi)405nm處讀取OD值。（參考波長：620-650nm）
