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德國IBL 腺病毒 IgM ELISA試劑盒
腺病毒 IgM ELISA試劑盒
(德國IBL:RE56581)
德國IBL中國*代理商“深圳科潤達(dá)生物工程有限公司”竭誠為您服務(wù)
 
1、應(yīng)用范圍
此酶免試劑盒可用于人血清和血漿中抗腺病毒IgM抗體的定性和定量檢測。
2、前言說明
腺病毒是人和動(dòng)物體內(nèi)普遍存在的一種病原體,可分為許不同的血清型。腺病毒是一種常年存在所有人群中的地方性疾病。 這種傳染病可以通過空氣傳播,也可通過塵埃傳播。腺病毒主要感染呼吸道黏膜和腸道黏膜,也會(huì)感染角膜。它們主要集中于上皮細(xì)胞和局部附屬淋巴結(jié)。腺病毒可 引起各種已知的呼吸道病毒性疾?。汉粑兰膊?、肺炎、與游泳池相關(guān)的咽結(jié)膜炎高燒和角膜結(jié)膜炎流行病。腺病毒的腸內(nèi)感染主要出現(xiàn)在小于一歲的小孩中。它主 要特點(diǎn)是出現(xiàn)流行性急性腸胃炎,通常是由腺病毒40和41引起的。分離腺病毒或血清學(xué)檢測可以檢測是否急性腺病毒感染。腺病毒的血清學(xué)檢測特別重要,因?yàn)?它可確定病人是否是急性腺病毒感染,另外它也用于大型流行病學(xué)的調(diào)查研究。ELISA主要測抗六聯(lián)體成分上群特異性決定簇的抗體。建議用于檢測特異性抗體 的檢測方法有:血凝抑制和血清中和實(shí)驗(yàn)。由于腺病毒到處都存在以及相關(guān)血清型之間的交叉反應(yīng),為了確定感染,可使抗體濃度提高4倍或更高的血清轉(zhuǎn)化就很有 必要了。在血清學(xué)檢測中,IgG是主要被檢測的抗體。
3、實(shí)驗(yàn)原理
此固相ELISA試劑盒利用的是夾心法。包被孔中包被了抗原。用對IgM具有特異性的酶標(biāo)二抗來檢測結(jié)合到包被抗原上的樣品特異性抗原。底物反應(yīng)后,所顯示的顏色強(qiáng)度與IgM特異性抗體的濃度成正比。樣品的結(jié)果可直接用標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得。
4試劑盒組成:
4×2ml
標(biāo)準(zhǔn)品A-D
1;10;40;150U/mL,待用
標(biāo)準(zhǔn)品A=陰性質(zhì)控           標(biāo)準(zhǔn)品B=臨界質(zhì)控
標(biāo)準(zhǔn)品C=弱陽性質(zhì)控         標(biāo)準(zhǔn)品D=陽性質(zhì)控
內(nèi)含抗腺病毒的IgM抗體,PBS(磷酸緩沖液),穩(wěn)定劑。
1×14ml
酶標(biāo)IgM
紅色,待用。內(nèi)含過氧酶標(biāo)記的抗人IgM,蛋白緩沖液,穩(wěn)定劑。
1×12×8
包被板
可拆,包被有特異性抗原。
1×14ml
TMB底物液
含TMB
1×14ml
TMB終止液
0.5M的H2SO4
1×60ml
稀釋液
含PBS緩沖液,<0.1%NaN3
1×60ml
濃縮洗滌液
濃縮型(10×),含PBS緩沖液,吐溫20
粘性金屬板
用于在溫育時(shí)遮蓋包被板
塑料袋
用于儲(chǔ)存不用的板條
5、實(shí)驗(yàn)所需材料但試劑盒不提供
1)       RF吸附劑
2)       移液器,體積:5;50;100;500 µL
3)       校準(zhǔn)儀
4)       樣品稀釋用試管(1ml)
5)       帶試劑儲(chǔ)器8道移液器
6)       洗滌瓶,自動(dòng)或半自動(dòng)洗板機(jī)
7)       能在450nm處讀數(shù)的酶標(biāo)儀
8)       雙蒸水或去離子水
9)       吸水紙,取樣吸頭和計(jì)時(shí)器
6、實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備說明
6.1成分準(zhǔn)備
稀釋/溶解
成分
 
稀釋液
比例
備注
貯存
穩(wěn)定性
60ml
洗滌液
加600ml
雙蒸水
1:10
加熱至37°C以溶解結(jié)晶,充分混合
2-8°C
 
8周
6.2樣品稀釋
樣品
稀釋
稀釋液
比例
備注
血清/血漿
全部稀釋
稀釋緩沖液
1:101
例:5µL+500µL
6.3用RF吸附劑處理:
注意
為了避免特異性IgG和類風(fēng)濕因子的干擾,病人的血清應(yīng)當(dāng)用RF吸附劑處理(RE59059)。
標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品千萬不要用RF吸附劑處理。
1.
在400µL按1:101的比例稀釋的樣品中加入20µL RF吸附劑。充分混合。
2.
室溫(18-25℃)下溫育≥1min(<15min)
為了避免吸附特異性抗體,應(yīng)當(dāng)避免溫育時(shí)間>15min。
預(yù)處理的樣品可能會(huì)是渾濁的。
7、實(shí)驗(yàn)步驟:
1)       加100µL標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品或已稀釋樣本于相應(yīng)反應(yīng)孔中,在定性檢測中只使用標(biāo)準(zhǔn)品B。
2)       封板后室溫(18℃-25℃)溫育60分鐘。
3)       移去粘性金屬板,棄去孔中液體。用300µL洗滌液洗板3次,在吸水紙上拍干。
4)       在每一微孔中加入100µL酶聯(lián)物。
5)       封板后室溫(18℃-25℃)溫育30分鐘。
6)       移去粘性金屬板,棄去孔中液體。用300µL洗滌液洗板3次,在吸水紙上拍干。加底物液和終止液時(shí),如果有條件的話,可使用8孔微量移液器。確保底物液和終止液都是相同的時(shí)間間隔加入。使用確切容積并避免氣泡產(chǎn)生。
7)       每孔加TMB底物液100µL。
8)       室溫(18℃-25℃)避光溫育20分鐘。
9)       在每一微孔中加入100µLTMB終止液以終止底物反應(yīng)。輕輕搖動(dòng)包被板以使試劑混合均勻。此時(shí),顏色藍(lán)色變成黃色。
10)    加終止液后60分鐘內(nèi)在450nm處測OD值。
8、結(jié)果計(jì)算
在半對數(shù)坐標(biāo)紙上或用自動(dòng)生成的方法,以標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為Y軸,濃度為X軸,繪制一標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。用立體圖、4參數(shù)對 數(shù)圖或?qū)?shù)-對數(shù)圖都可獲得良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。對于標(biāo)準(zhǔn)曲線圖,用標(biāo)準(zhǔn)品的每一單值進(jìn)行計(jì)算(樣品結(jié)果明顯異常的值必須刪除掉,應(yīng)使用更加合理的單值)。樣 品的濃度可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上獲得。一旦樣品稀釋了,就應(yīng)當(dāng)乘以相應(yīng)的稀釋因子。如果樣品所測得的濃度高于zui高標(biāo)準(zhǔn),則應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備說明所述對樣品進(jìn) 行稀釋,并重新檢測。
9、結(jié)果判定: > 12 U/ml  為陽性,8 - 12 U/ml  為可疑,< 8 U/ml  為陰性
此檢測結(jié)果并不是任何治療結(jié)果判定的*因素,它應(yīng)當(dāng)結(jié)合臨床觀察和診斷結(jié)果加以判斷。
本譯文僅供參考,詳情請以原文為準(zhǔn)。
 
 
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