柯薩奇病毒B IgM檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
通用名稱：柯薩奇病毒B IgM檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 英文名稱：Coxsackie virus B IgM ELISA 產(chǎn)品規(guī)格：96人份/T 產(chǎn)品貨號(hào)：EIA5175 產(chǎn)品品牌：德國DRG
柯薩奇病毒B IgM檢測試劑盒預(yù)期用途 柯薩奇病毒B IgM檢測試劑盒可用于定性檢測人血漿和血清中的柯薩奇病毒B（CoxB）IgM抗體。 柯薩奇病毒簡介 柯薩奇病毒屬于一種稱為腸病毒的病毒，特別是它們是小核糖核酸病毒。它們分為A和B兩大類。大多數(shù)柯薩奇病毒感染并不嚴(yán)重。它們通常僅引起輕微的體征和癥狀，例如發(fā)燒，皮疹，喉嚨痛，關(guān)節(jié)痛和頭痛。癥狀通常持續(xù)約一周?？滤_奇病毒感染經(jīng)常發(fā)生在幼兒中。A組病毒與無菌性腦膜炎，感冒，急性出血性結(jié)膜炎和急性心肌病有關(guān)，B組與急性心肌炎和脊髓灰質(zhì)炎樣麻痹有關(guān)。
尤其與柯薩奇B型病毒相關(guān)的綜合征是胸膜炎，也被稱為博恩霍爾姆病或惡魔性癲癇病，表現(xiàn)為嚴(yán)重的胸膜胸痛，有時(shí)伴有腹痛和嘔吐，自覺性腦膜炎，感冒以及心肌或心包感染。
近的免疫化學(xué)技術(shù)已用于通過IgM的ELISA試驗(yàn)對(duì)CoxB感染進(jìn)行早期診斷，作為近期感染的血清學(xué)標(biāo)志。
柯薩奇病毒B IgM檢測試劑盒檢測原理 用來自組織培養(yǎng)的天然柯薩奇B病毒抗原包被微孔板，其中包含其主要亞型。在初次孵育中，用稀釋的樣品處理固相，如果存在抗原，則捕獲抗CoxB IgM。洗掉樣品的所有其他成分后，在第二次孵育中，通過添加抗過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的抗hIgM抗體來檢測結(jié)合的抗CoxB IgM。固相上捕獲的酶作用在底物/色原混合物上，產(chǎn)生的光信號(hào)與樣品中存在的抗CoxB IgM抗體的量成比例。
因此，樣品中IgM的存在可以通過能夠區(qū)分陰性和陽性樣品的臨界值來確定。在試驗(yàn)中直接在孔中進(jìn)行IgG抗CoxB的中和，以阻止由于此類抗體在IgM測定中的干擾。 柯薩奇病毒B IgM檢測試劑盒組成成分 名稱 | 數(shù)量 | 成分 | | 包被板 | 1×12×8 | 可拆，包被有來自組織培養(yǎng)的天然柯薩奇病毒B抗原 | | 陰性質(zhì)控 | 1×4ml | 即用型，淡黃色。 | | 陽性質(zhì)控 | 1×4ml | 即用型，綠色。 | | 濃縮洗滌液 | 1×60ml | 濃縮型（20×）， 含PBS緩沖液. | | 酶聯(lián)物 | 1×16ml | 即用型，紅色 | | 底物液 | 1×16ml | 含TMB | | 終止液 | 1×15ml | 含0.3M的H2SO4 | | 樣本稀釋液 | 2×60ml | 即用型 | | 中和試劑 | 1×8ml | 含山羊抗hIgG。 |
實(shí)驗(yàn)所需材料不提供 1. 校準(zhǔn)的微量移液器（1000、100和10ul）和一次性塑料吸頭 2. EI*水（除臭或去離子水，用木炭處理以除去用作消毒劑的氧化性化學(xué)品） 3. 計(jì)時(shí)器 4. 吸水紙 5. 恒溫培養(yǎng)箱 6. 酶標(biāo)儀，450nm（讀數(shù)）和620-630nm 7. 洗板機(jī) 8. 渦流混合器 
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備 1. 檢查印在外部標(biāo)簽（主容器）上的試劑盒的失效日期。如果過期，請(qǐng)不要使用。 2. 檢查液體成分是否未被可見的顆?；蚓奂镂廴?。 3. 用無菌塑料移液器吸取少量的鉻（TMB），以檢查其是否為無色或淺藍(lán)色。 4. 檢查運(yùn)輸中是否沒有破損，箱子（主容器）內(nèi)沒有液體溢出。檢查包含微孔板的鋁袋是否未刺破或損壞。 5. 溶解報(bào)告的校準(zhǔn)物的內(nèi)容。 6. 如上所述稀釋20x濃縮洗滌溶液的所有內(nèi)容物。 7. 讓所有其他組分達(dá)到室溫（約1小時(shí)），然后將所有液體試劑渦旋輕輕混合。 8. 按照制造商的說明，將ELISA恒溫箱設(shè)置在+ 37℃并通過用稀釋的洗滌液灌注來準(zhǔn)備洗板機(jī)。設(shè)置正確的洗滌周期數(shù)（如在儀器驗(yàn)證中找到的那樣）。 9. 檢查酶標(biāo)儀是否已打開，或確保在讀數(shù)前至少20分鐘將其打開。 10. 如果使用自動(dòng)工作站，請(qǐng)打開電源，檢查設(shè)置，并確保使用正確的測定規(guī)程。 11. 檢查微量移液器是否設(shè)置為所需的體積。 12. 檢查所有其他設(shè)備是否可用并準(zhǔn)備就緒。 13. 如果出現(xiàn)問題，請(qǐng)勿繼續(xù)進(jìn)行測試并通知主管。 質(zhì)量控制 每當(dāng)使用試劑盒時(shí)，都要對(duì)質(zhì)控品和校準(zhǔn)品進(jìn)行驗(yàn)證檢查，以驗(yàn)證測定的性能是否符合IVDD指令98/79 / EC的預(yù)期和要求。 控制以下數(shù)據(jù)是否匹配： 校驗(yàn) | 要求 | 空白孔 | ＜0.100 OD 450nm值 | 陰性質(zhì)控 | 消隱后＜0.200平均OD 450nm值， 變異系數(shù)＜30％ | 陽性質(zhì)控 | OD 450 nm＞ 0.500 |
如果測試結(jié)果符合上述要求，請(qǐng)繼續(xù)進(jìn)行下一部分。如果沒有，請(qǐng)不要繼續(xù)進(jìn)行以下操作： 問題 | 校驗(yàn) | 空白孔 ＞0.100 OD 450nm值 | 1. 在測試過程中沒有污染鉻/底物溶液 | 陰性質(zhì)控 消隱后＞0.200 OD 450nm值， 變異系數(shù)＞30％ | 1.洗滌程序和洗板機(jī)設(shè)置是否符合資格預(yù)審研究的要求； 2.在使用前要使用正確的洗滌液并且已經(jīng)對(duì)洗板機(jī)進(jìn)行了底漆處理； 3.分析過程中沒有做過任何錯(cuò)誤（分配陽性質(zhì)控而不是陰性質(zhì)控）； 4.沒有由于陽性樣品或酶聯(lián)物的溢出而對(duì)陰性質(zhì)控或其孔造成污染； 5.微量移液器沒有被陽性樣品或酶聯(lián)物污染； 6.洗衣機(jī)針頭沒有被堵塞或部分阻塞。 | 陽性質(zhì)控 ＜0.500 OD 450nm | 1.該程序已正確執(zhí)行； 2.其分配沒有做錯(cuò)（分配錯(cuò)誤的質(zhì)控）； 3.洗滌程序和洗衣機(jī)設(shè)置是否符合資格預(yù)審研究的要求； 4.沒有發(fā)生陽性質(zhì)控的外部污染。 |
結(jié)果計(jì)算 如果測試有效，則通過陰性質(zhì)控（NC）的平均OD 450 nm值通過下式確定的臨界值（Co）計(jì)算結(jié)果：臨界= NC + 0.250 重要說明：當(dāng)結(jié)果計(jì)算是由ELISA自動(dòng)化工作站的操作系統(tǒng)執(zhí)行時(shí)，請(qǐng)確保使用正確的公式生成正確的結(jié)果解釋。
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